Krájení tkáňových bloků

• podle konstrukce mikrotomu:
  • sáňkový – krájení parfínových, celoidinových bločků
  • rotační – krájení parfínových bločků, výborný ke zhotovování sériových řezů
  • zmrazovací – tkáň se zmrazí přímo na stolečku, proti tomu bločku hýbeme nožem, kolem je normálně pokojová teplota ( rychlá biopsie, průkaz lipidů, vyšetření na enzymy )
  • kryostat – rotační mikrotom zasazený dochladícího boxu ( všude do -18ºC )
    • rychlá biopsie, průkaz enzymů, imunohistochemie
    • fixovaná i nefixovaná tkáň pak fixujeme formalínem
  • nože: různá délka, různý tvar
    • kratší ( kryostat, zmrazovací mikrotom )
    • delší ( sáňkový mikrotom, krájení parafínu )
  • speciální žiletky na krájení
  • průběh krájení:
    • záleží na úhlu nože
    • záleží na tom, jestli je tkáň dobře zalitá
  • napínání alepení parafínových řezů:
    • odmaštěné sklíčko
    • směs glycerin – bílek, bílek do odměrného válce, bílek také 1:1, bílek našleháme, přefiltrujeme přes vatu, přidáme kousek kafru ( konzervace ), do ledničky
      • už se tolik nepoužívá
      • nepřibarvuje se
    • kamencová želatina
      • 0,5 – 1%
      • k lepení řezů
      • přidáme k ní kamenec chromito draselný → síran, želatinu nevaříme, pouze zahříváme → přidáme kafr
      • během barvení se řezy vaří v mikrovlnce → řezy více vydrží → lépe lepí

Barvení histologických preparátů

• druhy histologických barviv:
  • kyselé komponenty
    • v buňkách a tkáních se barví zásaditými ( bazickými barvivy ) → bazofilní
    • jádro, jadérko, Nisselova tigroidní substance, základní amorfní hmota, chrupavky
  • zásadité komponenty
    • barví se kyselými barvivy ( acidofilní, eosinofilní → nejčastější barvivo je eosin )
    • cytoplazma, myofibrila
  • neutrální granula
    • nebarví se ani kyselými ani zásaditými barvivy

1. metachromatické barvení
   • barvení, při němž se některé struktury nebo tkáň barví v odlišné, barevném tónu, než je použité barvivo
   • toluidinová modř – granula červenofialová u žírných buňek
2. ortochromatické barvení – barvení je stejné jako použité barvivo

• vitální barvení : barvení zaživa
  • tripanová modř
  • v tkáňové kultuře na označení živých a mrtvých buněk

1. přirozená barviva:
   • hematoxin – eosin
   • šafrán
   • orcein
   • safranin
   • kermin
2. umělá barviva ( syntetická )

• in toto barvení – barvení bločku

Montování obarvených řezů

• montovací médium:
  • musí být průhledné
  • nesmí odbarvovat
  • musí být opticku homogenní ) stejný index lomu jako jako podložní a krycí sklo

• látky, které se nemísí s vodou, ale rozpouštějí se v xylenu
  • patří sem: pryskyřice
    1. přírodní – kanadský balzám
    2. syntetická – DPX, ENTELAN, SOLAKRYL, EUKITT
  • obarvené řezy musíme nejdříve odvodnit a prosytit xylenem
• látky, které se mísí s vodou
  • glycerin, glycerinová želatina, levulózový sirup, sirup z arabské gumy = Apathyho sirup
  • obarvené řezy uzavíráme přímo, aniž je odvodňujeme → při průkazu lipidů, enzymů